Analisi di laboratorio


 


Analisi di laboratorio

Il thermocycler esegue automaticamente i cambi di temperatura necessari per la PCR

La reazione a catena della polimerasi (in inglese: Polymerase Chain Reaction), comunemente nota con l'acronimo PCR, è una tecnica di biologia molecolare che consente la moltiplicazione (amplificazione) di frammenti di acidi nucleici dei quali si conoscano le sequenze nucleotidiche iniziali e terminali. L'amplificazione mediante PCR consente di ottenere in vitro molto rapidamente la quantità di materiale genetico necessaria per le successive applicazioni.

Tale metodica fu ideata nel 1983 da Kary B. Mullis il quale ottenne, per questo, il premio Nobel per la chimica (1993).

Meccanismo di funzionamento

La PCR ricostruisce in vitro uno specifico passaggio della riproduzione cellulare: la ricostituzione (sintesi) di un segmento di DNA "completo" (a doppia elica) a partire da un filamento a singola elica. CBA Laboratorio di Analisi Chimiche Batteriologiche Fisiche. Il filamento mancante viene ricostruito a partire da una serie di nucleotidi (i "mattoni" elementari che costituiscono gli acidi nucleici) che vengono disposti nella corretta sequenza, complementare a quella del DNA interessato.

Questo processo viene svolto in natura da enzimi chiamati DNA-polimerasi, che sono in grado di sintetizzare progressivamente un nuovo filamento di DNA nelle seguenti condizioni:

devono essere disponibili i nucleotidi da polimerizzare, sotto forma di desossiribonucelotidi trifosfati (dNTP);il DNA deve essere denaturato, ovvero le due eliche che compongono i filamenti devono essere già separate;il segmento da ricostruire può essere soltanto prolungato, ovvero non è possibile sintetizzare un nuovo filamento a partire da zero;devono inoltre essere rispettate opportune condizioni di temperatura, pH, ecc. Schema delle fasi di una PCR:1.  Denaturazione2.
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